ChiCTR2200065831 版本V1.0 版本创建时间2022/11/16 15:52:01 中国临床试验注册中心

审核状态：

Project audit state：

通过审核

Successful

注册号：

Registration number：

 ChiCTR2200065831 

最近更新日期：

Date of Last Refreshed on：

 2022-11-16 15:51:09 

注册时间：

Date of Registration：

 2022-11-16 00:00:00 

注册号状态：

预注册

Registration Status：

Prospective registration

注册题目：

基于肠道菌群代谢组学的隐匿性肝性脑病诊断标志物的筛选及临床应用

Public title：

Screening and clinical application of diagnostic markers for minimal hepatic encephalopathy based on gut microbiota metabolomics

注册题目简写：

隐匿性肝性脑病诊断标志物的筛选及应用

English Acronym：

Screening and application of diagnostic markers for minimal hepatic encephalopathy

研究课题的正式科学名称：

基于肠道菌群代谢组学的隐匿性肝性脑病诊断标志物的筛选及临床应用

Scientific title：

Screening and clinical application of diagnostic markers for minimal hepatic encephalopathy based on gut microbiota metabolomics

研究课题代号(代码)：

Study subject ID：

 2022BEG03128

在二级注册机构或其它机构的注册号：

The registration number of the Partner Registry or other register：

申请注册联系人：

罗明 

研究负责人：

白飞虎 

Applicant：

Ming Luo 

Study leader：

Fei-Hu Bai 

申请注册联系人电话：

Applicant telephone：

 +86-951-5920562

研究负责人电话：

Study leader's
telephone：

+86-951-5920562

申请注册联系人传真 ：

Applicant Fax：

 +86-951-5920562

研究负责人传真：

Study leader's fax：

 +86-951-5920562

申请注册联系人电子邮件：

Applicant E-mail：

 romean@sina.com

研究负责人电子邮件：

Study leader's E-mail：

 romean@sina.com

申请单位网址(自愿提供)：

Applicant website(voluntary supply)：

 http://www.nxrmyy.com/

研究负责人网址(自愿提供)：

Study leader's website(voluntary supply)：

 http://www.nxrmyy.com/

申请注册联系人通讯地址：

中国宁夏银川市金凤区正源北街301号

研究负责人通讯地址：

中国宁夏银川市金凤区正源北街301号

Applicant address：

301 Zhengyuan North Street, Jinfeng District, Yinchuan, Ningxia Hui Autonomous Region, PR China.

Study leader's address：

301 Zhengyuan North Street, Jinfeng District, Yinchuan, Ningxia Hui Autonomous Region, PR China.

申请注册联系人邮政编码：

Applicant postcode：

 750021

研究负责人邮政编码：

Study leader's postcode：

 750021

申请人所在单位：

宁夏回族自治区人民医院

Applicant's institution：

People’s Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region

研究负责人所在单位：

宁夏回族自治区人民医院

Affiliation of the Leader：

People’s Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region

是否获伦理委员会批准：

是

Approved by ethic committee：

Yes

伦理委员会批件文号：

Approved No. of ethic committee：

 伦理[2021]-ZDYF-025

伦理委员会批件附件：

Approved file of Ethical Committee：

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批准本研究的伦理委员会名称：

宁夏回族自治区人民医院医学伦理委员会

Name of the ethic committee：

Medical Ethics Committee of Ningxia Hui Autonomous Region People's Hospital

伦理委员会批准日期：

Date of approved by ethic committee：

 2021-09-04 00:00:00

伦理委员会联系人：

王楠

Contact Name of the ethic committee：

Wang Nan

伦理委员会联系地址：

中国宁夏银川市金凤区正源北街301号

Contact Address of the ethic committee：

301 Zhengyuan North Street, Jinfeng District, Yinchuan, Ningxia Hui Autonomous Region, PR China.

伦理委员会联系人电话：

Contact phone of the ethic committee：

 +86 951 5920152

伦理委员会联系人邮箱：

Contact email of the ethic committee：

 wangnannph@126.com

研究实施负责（组长）单位：

宁夏回族自治区人民医院

Primary sponsor：

People’s Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region

研究实施负责（组长）单位地址：

中国宁夏银川市金凤区正源北街301号

Primary sponsor's address：

301 Zhengyuan North Street, Jinfeng District, Yinchuan, Ningxia Hui Autonomous Region, PR China.

试验主办单位(项目批准或申办者)：

Secondary sponsor：

国家：

中国

省(直辖市)：

宁夏回族自治区

市(区县)：

银川市

Country：

China

Province：

Ningxia Hui Autonomous Region

City：

Yinchuan

单位(医院)：

宁夏回族自治区人民医院

具体地址：

中国宁夏银川市金凤区正源北街301号

Institution
hospital：

People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region

Address：

301 Zhengyuan Street North, Jinfeng District, Yinchuan, Ningxia Hui Autonomous Region, China

经费或物资来源：

宁夏回族自治区重点研发计划

Source(s) of funding：

Key Research and Development Project of Ningxia

研究疾病：

隐匿性肝性脑病  

Target disease：

minimal hepatic encephalopathy

研究疾病代码：

DB99.5

Target disease code：

DB99.5

研究类型：

诊断试验

Study type：

Diagnostic test

研究所处阶段：

 诊断试验新技术临床试验 

Study phase：

Diagnostic New Technique Clincal Study

研究设计：

诊断试验诊断准确性 

Study design：

Diagnostic test for accuracy 

研究目的：

肝硬化患者的肠道菌群失调可通过“肠-肝-脑”轴诱发隐匿性肝性脑病，是隐匿性肝性脑病的主要发病机制。我们前期研究发现肝硬化患者肠道菌群失调与隐匿性肝性脑病的发病率密切相关。本项目拟在前期研究基础上，基于肠道菌群代谢组学方法，应用超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）技术，分析隐匿性肝性脑病患者肠道菌群代谢产物，构建隐匿性肝性脑病患者肠道菌群代谢网络，筛选隐匿性肝性脑病的诊断标志物，在临床上辅助诊断隐匿性肝性脑病，为早期诊断隐匿性肝性脑病开辟新的思路和方法。  

Objectives of Study：

Gut microbiota dysregulation in patients with liver cirrhosis can induce minimal hepatic encephalopathy through the "gut-liver-brain" axis, which is the main pathogenesis of minimal hepatic encephalopathy. Our previous study found that gut microbiota dysregulation was closely related to the occurrence of minimal hepatic encephalopathy in patients with liver cirrhosis. Based on the previous research and the gut microbiota metabonomics, application of ultra high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry (UPLC/MS/MS) technology, we analyzed the gut microbiota metabolites, constructed the gut microbiota metabolic network, and screened the diagnostic markers in patients with minimal hepatic encephalopathy, in order to provide new ideas and methods for early diagnosis of minimal hepatic encephalopathy.

药物成份或治疗方案详述：

1.隐匿性肝性脑病的诊断 纳入实验组的乙肝肝硬化患者（60例）在安静环境下独立接受肝性脑病心理测试积分（PHES）量表测试，以诊断纳入研究的乙肝肝硬化患者是否患有隐匿性肝性脑病。PHES测试包括5项子测试：数字连接试验-A（NCT-A）、数字连接试验-B（NCT-B）、数字符号试验（DST）、轨迹描绘试验（LTT）和系列打点试验（SDT），记录完成PHES量表测试所包含5项测试的时间，对照《肝硬化肝性脑病诊疗指南》（2018年版）提供的中国人群匹配年龄和教育程度的健康人群数据进行评分，以在中国人群中验证的PHES＜-4分作为诊断隐匿性肝性脑病的阈值。 2.粪便样本采集及处理 收集所有入组患者新鲜粪便，置于无菌粪便采集管，明确标记后10分钟内送到实验室，迅速转移至-80℃低温冰箱冻存。样本在4℃融化，质量控制后使用甲醇提取代谢物，甲醇和粪便的比例为5:1（mg/g）,充分混匀后，在10000g，4℃条件下离心10分钟，上清液经过滤膜（孔径0.22μm）过滤后，转移到超高效液相色谱（UPLC）专用玻璃瓶中待检。 3.色谱检测 应用Waters ACQUITY UPLC I-Class超高效液相色谱系统，采用ACQUITY UPLC BEHC 18分析柱进行反向分离。流动相Ａ: 水/甲酸（99.9:0.1,体积/体积），流动相Ｂ：乙腈/甲酸（99.9:0.1,体积/体积）。流动相的流速为400μl/min，流动相A和B的比例呈线性变化，洗脱后的样本直接进入质谱检测。 4.质谱检测 应用Waters Q-TOF Premier质谱仪，电离源采用ESI负离子模式，离子源的温度为100℃。中和及干燥气体为氮气，其流速恒定在 450L/h。质谱的扫描范围为m/z 50-1000，数据采集频率0.3s. 采用氩作为碰撞气体，碰撞能量设定在5.0eV. 串联质谱（MS-MS）分析根据目标化合物的稳定性使用不同碰撞能量。飞行时间质谱分析（Q-TOF）的离子飞行模式选用V模式，最大分辨率＞10000. 5.统计分析 用MassLynx v4.1软件和Mark-erLynx XS v4.1软件对超高效液相色谱-串联质谱法（UPLC-MS/MS）检测得到的原始数据进行提取、峰判别、峰对齐和归一化等处理。使用SIMCA-P 12.0软件进行主成分分析（PCA）、偏最小二乘法判别分析（PLS-DA）和正交偏最小二乘法判别分析（OPLS-DA）。通过与HMDB和Massbank等数据库比对，确定其差异变量对应的物质，并对差异物质进行受试者工作特征（ROC）曲线分析，筛选出隐匿性肝性脑病的诊断标志物。 6.临床应用 在验证组的乙肝肝硬化患者（40例）中，使用隐匿性肝性脑病诊断标志物筛查是否患有隐匿性肝性脑病，使用ROC曲线评估隐匿性肝性脑病诊断标志物的有效性，计算灵敏度，特异度，阳性预测值、阴性预测值和准确度。 

Description for medicine or protocol of treatment in detail：

1.Diagnosis of minimal hepatic encephalopathy The included 60 patients with hepatitis B-related liver cirrhosis will be independently tested with the psychometric hepatic encephalopathy score (PHES) in a quiet environment to diagnose minimal hepatic encephalopathy. The PHES test includes 5 subtests: number connection test-A (NCT-A), number connection test-B (NCT-B), serial dotting test (SDT), line tracing test (LTT) and digit symbol test (DST). The time to complete the 5 subtests of the PHES will be recorded. Compared with the data of age and education-matched healthy Chinese population provided by the Guidelines for the Diagnosis and Treatment of Hepatic Encephalopathy in Liver Cirrhosis (version 2018), the PHES score < -4 points which has been verified in the Chinese population will be used as the threshold for the diagnosis of minimal hepatic encephalopathy. 2.Fecal sample collection and processing Fresh feces of all included patients will be collected using sterile fecal collection tube and sent to the laboratory within 10 minutes. The samples will be clearly marked and stored at -80℃.The samples will be melted at 4℃, and the metabolites will be extracted with methanol after quality control. The ratio of methanol to feces is 5:1 (mg/g). After being fully mixed, the samples will be centrifuged at 4℃ with 10000g for 10 min. The supernatant will be filtered through a filter membrane (pore size 0.22μm) and transferred to a special glass bottle for ultra high performance liquid chromatography (UPLC) testing. 3.Chromatographic detection Reverse separation will be performed using the Waters ACQUITY UPLC I-Class ultra-high performance liquid chromatography system with the ACQUITY UPLC BEHC 18 analytical column. Mobile phase A: water/formic acid (99.9:0.1, volume/volume), mobile phase B: acetonitrile/formic acid (99.9:0.1, volume/volume). The flow rate of mobile phase is 400μl/min, and the ratio of mobile phase A and B is linearly varied. After elution, the samples will be directly detected by mass spectrometry. 4.Mass spectrometry ESI negative ion mode will be used in the Waters Q-TOF Premier mass spectrometer. The temperature of ion source is 100℃. The neutralization and drying gas is nitrogen, whose flow rate is constant at 450L/h. The scanning range of MS is m/z 50-1000, and the data acquisition frequency is 0.3s. Argon is used as the impact gas and the impact energy is set at 5.0eV. Series mass spectrometry (MS-MS) analysis will be used with different impact energies according to the stability of the target compound. The ion flight mode of Q-TOF is V mode, and the maximum resolution is > 10000. 5.Statistical analysis MassLynx v4.1 software and Mark-erLynx XS v4.1 software will be used to extract, discriminate, align and normize the original data detected by UPLC-MS/MS. Principal component analysis (PCA), partial least squares discriminant analysis (PLS-DA) and orthogonal partial least squares discriminant analysis (OPLS-DA) will be performed using SIMCA-P 12.0 software. By comparing with HMDB and Massbank databases, the substances corresponding to the differential variables will be determined, and the receiver operating characteristic (ROC) curve will be analyzed for the differential metabolites to screen the diagnostic markers of minimal hepatic encephalopathy. 6.Clinical application In 40 patients with hepatitis B-related liver cirrhosis in the validation cohort, diagnostic markers for minimal hepatic encephalopathy will be used to screen minimal hepatic encephalopathy. The ROC curve will be used to evaluate the effectiveness, sensitivity, specificity, positive predictive value, negative predictive value and accuracy of diagnostic markers for minimal hepatic encephalopathy.  

纳入标准：

1.根据《慢性乙型肝炎防治指南》（2019年版）确诊的成年乙肝肝硬化患者；2.具有正常的阅读及认知能力，能够独立完成肝性脑病心理测量评分（PHES）；3.本人同意参加此项研究。

Inclusion criteria

1.Adult patients with hepatitis B-related liver cirrhosis diagnosed according to the Guidelines for the Prevention and Treatment of Chronic Hepatitis B (2019 edition)
2.Subjects have normal reading and cognitive abilities, and are able to independently complete the psychometric hepatic encephalopathy score(PHES) testing;
3.Subjects have agreed to participate in this study.

排除标准：

1.根据《肝硬化肝性脑病诊疗指南》（2018年版）诊断为显性肝性脑病；2.有精神心理或神经系统方面疾病；3.近1月内服用镇静剂或中枢神经系统抑制剂；4.合并酒精性肝硬化，肝细胞癌或其他恶性肿瘤；5.近1月内出现消化道出血，水、电解质、酸碱平衡紊乱。

Exclusion criteria：

1.Diagnosed as overt hepatic encephalopathy according to the Guidelines for Diagnosis and Treatment of Hepatic Encephalopathy in Liver Cirrhosis (2018 edition);2.With mental or nervous system diseases;3.Taking sedatives or central nervous system inhibitors within the last one month;4.Alcoholic cirrhosis, hepatocellular carcinoma or other malignancies;5.Gastrointestinal bleeding and water, electrolyte, acid-base imbalance within the last one month.

研究实施时间：

Study execute time：

从 From 2022-11-21 00:00:00至 To 2023-11-21 00:00:00  

征募观察对象时间：

Recruiting time：

从 From 2022-11-21 00:00:00 至 To 2023-11-21 00:00:00

诊断试验：

Diagnostic Tests：

金标准或参考标准（即可准确诊断某疾病的单项方法或多项联合方法，在本研究中用于诊断是否有该病的临床参考标准）：

肝性脑病心理测试积分（PHES）量表

Gold Standard or Reference Standard (The clinical reference standards required to establish the presence or absence of the target condition in the tested population in present study):

Psychometric hepatic encephalopathy score (PHES)

指标试验（即本研究的待评估诊断试验，无论为方法、生物标志物或设备，均请列出名称）：

肠道菌群 肠道菌群代谢物

Index test:

Gut microbiota Metabolites of gut microbiota

目标人群（可以是某种疾病患者或正常人群，详细描述其疾病特征，注意应纳入符合分布特点的全序列病例，具有良好的代表性）

乙肝肝硬化导致的隐匿性肝性脑病患者

例数:

Sample size:

0

Target condition (The target condition is a particular disease or disease stage that the index test will be intended to identify. Please specify the characteristics in detail; the population should has a complete spectrum and good representative):

Patients with minimal hepatic encephalopathy due to hepatitis B-related liver cirrhosis

容易混淆的疾病人群（即与目标疾病不易区分的一种或多种不同疾病，应避免采用正常人群对照的病例-对照设计）：

乙肝肝硬化导致的显性肝性脑病患者

例数:

Sample size:

100

Population with condition difficult to distinguish from the target condition, the normal population in a case-control study design should be avoid:

Patients with overt hepatic encephalopathy due to hepatitis B-related liver cirrhosis

研究实施地点：

Countries of recruitment and research settings：

国家：

 中国

省(直辖市)：

 宁夏回族自治区 

市(区县)：

 银川市 

Country：

China

Province：

Ningxia Hui Autonomous Region

City：

Yinchuan

单位(医院)：

 宁夏回族自治区人民医院 

单位级别：

 三级甲等医院 

Institution
hospital：

People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region

Level of the institution：

Tertiary A

测量指标：

Outcomes：

指标中文名：

肠道菌群代谢物

指标类型：

主要指标

Outcome：

Metabolites of gut microbiota

Type：

Primary indicator

测量时间点：

PHES测试当日的上午

测量方法：

非靶向代谢组学分析

Measure time point of outcome：

The morning of the day of PHES testing

Measure method：

Untargeted metabolomics analysis

指标中文名：

ROC 曲线

指标类型：

主要指标

Outcome：

ROC curve

Type：

Primary indicator

测量时间点：

测量方法：

Measure time point of outcome：

Measure method：

指标中文名：

灵敏度

指标类型：

主要指标

Outcome：

sensitivity

Type：

Primary indicator

测量时间点：

测量方法：

Measure time point of outcome：

Measure method：

指标中文名：

特异度

指标类型：

主要指标

Outcome：

Specificity

Type：

Primary indicator

测量时间点：

测量方法：

Measure time point of outcome：

Measure method：

指标中文名：

阳性预测值

指标类型：

主要指标

Outcome：

positive predictive value

Type：

Primary indicator

测量时间点：

测量方法：

Measure time point of outcome：

Measure method：

指标中文名：

阴性预测值

指标类型：

主要指标

Outcome：

negative predictive value

Type：

Primary indicator

测量时间点：

测量方法：

Measure time point of outcome：

Measure method：

指标中文名：

准确度

指标类型：

主要指标

Outcome：

Accuracy

Type：

Primary indicator

测量时间点：

测量方法：

Measure time point of outcome：

Measure method：

采集人体标本：

Collecting sample(s)
from participants：

标本中文名：

粪便

组织：

Sample Name：

feces

Tissue：

人体标本去向

 使用后销毁  

说明

在-80℃条件下保存1年

Fate of sample：

Destruction after use  

Note：

Stored at -80°C for 1 year

征募研究对象情况：

Recruiting status：

尚未开始

Not yet recruiting

年龄范围：

Participant age：
最小 Min age 18 岁 years
最大 Max age 70 岁 years

性别：

男女均可

Gender：

Both

随机方法（请说明由何人用什么方法产生随机序列）：

研究者将使用倾向性评分匹配的方法将纳入的患者随机化分组

Randomization Procedure (please state who generates the random number sequence and by what method)：

The investigators will use the propensity score matching method to randomize included patients to groups

是否公开试验完成后的统计结果:

Calculated Results after the Study Completed public access:

公开/Public

盲法：

Blinding：

试验完成后的统计结果（上传文件）：

Calculated Results after
the Study Completed(upload file)：

是否共享原始数据：

IPD sharing

是Yes

共享原始数据的方式（说明：请填入公开原始数据日期和方式，如采用网络平台，需填该网络平台名称和网址）：

NCBI数据库, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

The way of sharing IPD”(include metadata and protocol, If use web-based public database, please provide the url)：

NCBI Database, https://www.ncbi.nlm.nih.gov/

数据采集和管理（说明：数据采集和管理由两部分组成，一为病例记录表(Case Record Form, CRF)，二为电子采集和管理系统(Electronic Data Capture, EDC)，如ResMan即为一种基于互联网的EDC：

本研究采用病例记录表

Data collection and Management (A standard data collection and management system include a CRF and an electronic data capture：

Case Record Form will be uesd in this study

数据与安全监察委员会：

Data and Safety Monitoring Committee：

有/Yes

注册人：

Name of Registration：

  2022-11-16 15:51:10